《生物化学》实验教学大纲

《生物化学》实验教学大纲 （供五年制临床医学、口腔医学、预防医学、护理学、 社会体育等本科专业使用）

Ⅰ 前言

本教学大纲按照本校五年制教学计划制定，该计划中生物化学学科为120学时，其中生物化学理论课为88学时，实验课为32学时，因此生物化学实验课程安排8个实验，每个实验为4学时，目的在于培养学生的动手能力和解决实际问题的能力。本教学大纲适用于临床医学、口腔医学、预防医学、护理学、生物医学工程等专业。

一、实验教学的基本要求 生物化学实验教学以学生在实验室实践为主,?发挥学生的主体作用，教师只作必要的实验原理和注意事项的讲解,并注意引导学生拓展所学的内容，通过实验内容的学习了解生物化学技术的原理和操作要点，提高学生的实践能力和创新能力。

二、实验考核 实验总成绩包括实验过程表现成绩和实验报告成绩。其中实验过程表现成绩包括学习态度是否认真、实验操作是否正确规范、实验结果是否正确、是否具有创新意识、打扫卫生等方面；成绩分为优秀、良好、一般、差三级；相当于百分制90分以上、75~90分、60~75分、60分以下。实验报告成绩包括实验报告的格式是否正确、原理是否论述清楚、实验结果分析讨论是否符合逻辑，报告字迹是否清楚等方面；成绩分为A、A^－、B、B^－、C、C^－；相当于百分制95~100分、90~94分以上、80~89分、70~89分、60~69分及60分以下。

三、主要参考资料 1．《生物化学》 高教出版社 沈 同；2．《生物化学》 高教出版社 古练权；3．《生物化学实验技术》讲义 沈阳农业大学。

Ⅱ 正文

实验1 生物化学实验技术简介

实验目的熟悉生物化学实验的目的；学习实验基本技术：分光光度法，层析法、离心法、电泳法等；

学习玻璃仪器的使用和清洗；掌握实验报告的书写格式和要求；示教分光光度计操作。

实验2 改良微量克氏定氮法测定血清蛋白质总量

一、实验目的

掌握微量克氏定氮法测定蛋白质的原理及操作。 复习分光光度法测定的实验原理及操作技术。了解人体血浆蛋白质的含量测定的一种方法。

二、实验内容

将样品血清氧化并固定有机氮，用硫酸铵与碱性试剂显色，用定氮法测定蛋白质的含量。

实验3 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

一、实验目的学习常压电泳的实验原理，熟悉醋酸纤维素薄膜电泳操作技术，测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。初步掌握人体血浆蛋白质的电泳分类及定性技术。

二、实验内容

用醋酸纤维素薄膜作为支持物，在碱性溶液中血清蛋白质各组分由于所带电荷和分子大小不同而分离，电泳后染色后主要分为5条带，并加氢氧化钠洗脱各条带，分光光度计比色，定量，进行结果判断。

实验4 血清γ-球蛋白的提纯

1. 实验目的

掌握盐析、凝胶层析、透析、离心等技术。二、实验内容

从动物血清提取蛋白质，并用硫酸铵盐析法分离，浓缩，凝胶层析过滤分离蛋白质和小分子，缩二脲试剂检测蛋白质，纳氏试剂检测铵离子。

实验5 酶促反应动力学

实验目的

学习标准曲线的绘制，计算Km值的双倒数作图方法。二、实验内容

用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值，观察底物浓度和抑制剂磷酸氢二钠对酶促反应的影响。

实验6 细胞核的分离与核酸的测定

实验目的

学习离心技术，亚细胞的分离和DNA、RNA的鉴定；学习盐溶液法从动物组织中提取脱氧核糖核酸的原理及操作方法。二、实验内容

用动物肝脏制备匀浆，离心分离细胞浆和细胞核，用不同浓度的盐溶液提取其中的RNA和DNA，用显色剂鉴定。

实验7 血糖测定（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响

实验目的

掌握血糖测定原理和肾上腺素对血糖浓度的影响，学习测定计算方法；掌握血糖浓度的参考正常值，了解血糖测定的临床意义。

二、实验内容

收集注射肾上腺素前后动物耳缘静脉血，制备血清。血清中葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者与苯酚及4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下产生红色化合物。比色测定血糖浓度。

实验8 尿中肌酐、尿酸含量的测定

一、 实验目的

掌握苦味酸法测定肌酐、尿酸在碱性条件还原磷钨酸的实验原理和方法。

二、实验内容肌酐与苦味酸反应产生红色，比色分析可计算其含量；尿酸在碱性条件还原磷钨酸成为兰色，比色计算含量。增高见于肢端肥大症、巨人症、糖尿病、伤寒、斑疹伤寒、破伤风、甲状腺机能减退等、减低见于甲状腺机能亢进、贫血、瘫痪、肌萎缩、活动性皮肤炎、进行性肾病及肾功能衰竭末期、白血病等。尿酸是嘌呤的分解代谢产物，排出量与肌肉组织的份量成正比，运动加强，发热等排出增加，肌肉萎缩，肾功能不全时减少。

实验9 血清白蛋白的分离纯化与鉴定

1. 实验目的

学会运用离心、盐析、透析及电泳等方法分离及鉴定牛血清白蛋白。

1. 实验内容

利用所学过的实验方法从动物血清中提取白蛋白，并用硫酸铵盐析法分离，浓缩，透析法分离蛋白质和小分子。用醋酸纤维素薄膜作为支持物，电泳后染色进行结果判断。

Ⅲ 教学组织与方法

实施机构：由基础部生物化学教研室执行。

1. 组织内容：集体教学备课、教案讲义审核、教学方法研究、教学手段应用。
2. 教学方法：
   1. 1. 实验教学：采用启发式、讨论式课堂教学方式，辅助现代和传统教学手段。一般内容以自学为主。

2. 教学点：在生物化学实验室教学，承担教师由生物化学教研室委派。

3. 辅导形式：课堂答疑、讨论、复习等结合。

Ⅳ 教学时数分配表1（临床专业）

	实验内容	教学时数	实验类型
实验一	生物化学实验技术简介	4	综合型
实验二	改良微量克氏定氮法测定血清蛋白质总量	4	验证型
实验三	血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳	4	验证型
实验四	血清γ-球蛋白的提纯	4	综合型
实验五	酶促反应动力学	4	验证型
实验六	细胞核的分离与核酸的测定	4	验证型
实验七	血糖浓度的测定（葡萄糖氧化酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响	4	综合型
实验八	血清白蛋白的分离纯化与鉴定	4	设计性
合计		36

Ⅳ 教学时数分配表2（护理、社会体育专业）

	实验内容	教学时数	实验类型
实验一	血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳	4	验证型
实验二	尿中肌酐、尿酸含量的测定	4	综合型
实验三	血糖浓度的测定（葡萄糖氧化酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响	4	综合型
合计		12