细胞的分裂指数

分裂指数是衡量体外培养细胞生长增殖状况的重要指标，常用细胞群体中分裂细胞所占的百分比来表示。分裂指数是测定细胞周期的一个重要指标，与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。同时，分裂指数也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
（一）仪器、用品与试剂
超净工作台、细胞培养箱、普通显微镜、细胞培养皿、盖玻片、吸管、细胞培养基（如添加有10％ FBS的RPMI1640）、添加有0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化液、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液、PBS溶液。
（二）操作步骤
1．将消化、洗涤后培养细胞以一定密度接种至内含盖玻片的培养皿中。
2．置细胞培养箱中培养48h，使细胞贴附在盖玻片上生长。
3．取出盖玻片，按下列顺序操作：PBS漂洗3min→固定液（甲醇：冰醋酸=3：1体积比）固定30min→Giemsa染液染色10min→自来水冲洗。
4．待盖玻片晾干后将其反扣在载玻片上，镜检。
5．计算结果：分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%
（三）注意事项
1．操作时动作要轻，以免使盖玻片上的细胞脱落。
2．细胞接种密度、培养时间有细胞的种类及生长习性决定。
（四）附录
Giemsa染液配制：
（1）Giemsa原液的配制：称Giemsa粉末0.5克，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33ml），56℃中保温90-120min后再加入33ml甲醇，置棕色瓶中保存。
（2）使用时按要求用PBS稀释，常用的稀释比例为1：10。