革兰氏染色

英文对照

gram stain; gram ' s stain; gram ′ s dye;

定义

革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。

该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。

实验器材

培养12-16h的枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的大肠杆菌（Escherichia coli）结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红、液体石蜡、擦镜液、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。

实验步骤

单菌的革兰氏染色

分别取枯草杆菌、大肠杆菌进行革兰氏染色。

1. 制片
   1. 涂菌 取干净载玻片一块，在载玻片上加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，注意取菌不要太多。
   2. 干燥：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。
   3. 固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）
2. 染色
   1. 初染：滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1～2min，水洗。
   2. 媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。
   3. 脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95％的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。
   4. 复染：用番红液复染约2min，水洗。
3. 镜检：干燥后，用油镜观察。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。

混菌的革兰氏染色

按上述方法，在同一载玻片上，以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌作混和涂片、染色、镜检